细菌的测定和计量方式有哪些?
对于生物氧化过程中的细菌,使用时需要知道菌液中所含的细菌数量。测定和计量细菌的数量一般有以下几种方法:
(1)比浊法。其原理是因为菌体不透光,利用菌液所含细菌浓度不同,液体的浑浊度则不同,然后利用分光光度计测定菌液的光密度。用测得的光密度和标准曲线对比,即可得知菌液的密度。
(2)直接计数法。该方法是利用血球计数器(Hemocytometer),直接在显微镜下观察计数所取菌液样品中的细菌数量。
(3)平皿计数法。该方法是将所要测定的菌液取出后,稀释成一定的倍数,用固体培养基制成平板,然后在一定的温度下进行培养,使其长成菌落(Colony formation unit,CFU),计算出菌落数,再乘以稀释倍数,则得到所测菌液的活菌浓度。
(4)液体稀释法。该方法是将菌液按连续的10倍系列在培养基中稀释成不同的浓度,然后进行培养。经培养后,记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查最大可能数表(Most probable number,MPN,见有关微生物实验教材),根据样品的稀释倍数就可计算出其中活菌的含量。
(5)细胞干重测定法。该方法是将菌液离心或过滤后,洗涤除去培养基成分后转移到适的容器中,置100~105℃干燥箱烘干或低温低压干燥(60~80℃)至恒重后称重。一般细胞干重为细胞湿重的10%~20%,对于细菌,一个细胞重约10-12~10-13g。
目前,采用较多的微生物生长测定方法是比浊法、直接计数法和液体稀释法。以上均为直接计数方法。此外,也有采用蛋白质分析方法来估测细菌的数量。
2011-01-22
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